Fa'aoga ma puipuiga ole fa'apa'au centrifuge ultrafiltration
1) Filifili se paipa ultrafiltration talafeagai.Manatua o UF membranes e eseese i lo latou maualuga o le faapalepale i vailaʻau eseese.E masani lava, o paipa ultrafiltration fa'atasi ai ma le 10 kDa molecular weight cut-off e mafai ona filifilia ma se molecular weight cut-off e le tatau ona sili atu nai lo le 1 / 3 o le mamafa mole o le polotini e fiafia i ai, pei ole 35 kDa.Afai o le mamafa mole mole o le polotini o le tului e tusa ma le 10 kd, e mafai ona fa'aogaina se fa'alava ultrafiltration fa'atasi ai ma le mamafa mole mole e 3 KD.
(2) O le ultrafiltration, faatoa faʻatau, e mago, faʻatasi ai ma le vai ultrapure faʻaopoopo aʻo leʻi faʻaaogaina ma le vai atoa na pasia i totonu o le membrane, taʻele aisa poʻo le pusaaisa muaʻi malulu mo ni nai minute.Ona sasaa ese lea o le vai, e pei o le vai porotini, ma pe fia le mea e faaopoopo, po o fea lava e le sili atu i le laina paepae i luga o le paipa.E mama le taʻaloga, ma e manaʻomia ona faʻamalo le faʻamalo ultrafiltration i luga o le aisa aʻo leʻi faʻaopopoina le vaifofo porotini.
3) O le mamafa ma le ogatotonu o le kalave e tatau ona oʻo i le paleni.Manatua le saoasaoa o le taamilosaga ma le faʻavavevave e le vave tele, a le o lea e faʻaleagaina saʻo ai le membrane ultrafiltration.Na amata le fa'amama ole centrifugal (fa'amalo le centrifuge ile 4 tikeri).Ina ua uma ona liua le RPM o centrifuges eseese i le g, sa ese.O le faʻavaveina o le centrifuge na faʻafetaui i se mea maualalo, faʻaitiitia ai le mamafa i luga o le membrane.Manatua, ia mautinoa e alu ese mai le centrifuge pe a uma ona oʻo le centrifuge i lona saoasaoa, pe afai e iai sau faʻafitauli, e le mafai ona e taulimaina mo le taimi muamua.O le faʻatonuga o le membrane i le spindle na fetuunai e tusa ai ma faʻatonuga (o le centrifuge case o le membrane i le axis perpendicular).I le faʻaaogaina masani, o le saoasaoa o le taamilosaga lautele e maualalo ifo nai lo le faʻatonuga, ina ia mafai ai ona faʻalauteleina le ola o le centrifuge tube.
3) O le mamafa ma le ogatotonu o le kalave e tatau ona ausia le paleni.Manatua le saoasaoa o le taamilosaga ma le faʻavavevave e le vave tele, a le o lea e faʻaleagaina saʻo ai le membrane ultrafiltration.Na amata le fa'amama ole centrifugal (centrifuge mua'i mālūlū ile 4 tikeri).Ina ua uma ona liua le RPM o centrifuges eseese i le g, sa ese.O le faʻavavevave o le centrifuge na faʻafetaui i se mea maualalo, faʻaitiitia ai le mamafa i luga o le membrane.Manatua, ia mautinoa e alu ese le centrifuge pe a uma ona oʻo le centrifuge i lona saoasaoa, pe afai e iai sau faʻafitauli, e le mafai ona e taulimaina mo le taimi muamua.O le faʻatonuga o le membrane i le spindle na fetuunai e tusa ai ma faʻatonuga (o le centrifuge case o le membrane i le axis perpendicular).I le faʻaaogaina masani, o le saoasaoa o le taamilosaga lautele e maualalo ifo nai lo le faʻatonuga, ina ia mafai ai ona faʻalauteleina le ola o le centrifuge tube.
(4) A faʻapipiʻi i le 1ml totoe, ave le 50ul o le vaifofo paʻu, faʻaopopo le 10ul o le tafe i totonu ma vaʻai pe i ai se lanu lanumoana, e fai ma faʻamasinoga pe o le ultrafiltration tube o loʻo misi le porotini.Afai o le fa'agaau e tafe, toe sasaa le pito i luga ma tafe i totonu o se paipa fou e amata ai le ultrafiltration.Ina ia iloa tonu pe na misia ni paipa, fa'amama mo le 10min i le 5mgml o le BSA a'o le'i tafe, fa'aoga i luga o le kelu porotini, po'o le su'esu'ega fa'afefete a Bradford, ma fa'aauau i le fa'aopoopoina o le vaifofo fa'apolotini fa'ato'a totoe (lea e galue i luga o le aisa ma puipuia ai polotini mai le vevela) seia ua faaopoopo uma le concentrate.Fa'aeteete i le taimi ole fa'a'ese'ese pe a o'o mai le timu o polotini, e o'o atu ai i le tapuni o paipa.Afai e timu, fuafua pe o le mafua'aga patino o le timu o le fa'atupuina o le polotini po'o se pa'u le talafeagai;O le mea muamua e mafai ona foia e ala i le ultrafiltration o tele ultrafiltration tubes i le taimi e tasi, faʻaitiitia le faʻatonuga, ma le mea mulimuli e ala i le fesuiaʻiina o vaifofo paʻu eseese seia oʻo ina leai se timu o le polotini e tupu.
(4) A faʻapipiʻi i le 1ml totoe, ave le 50ul o le vaifofo paʻu, faʻaopopo le 10ul o le tafe i totonu ma vaʻai pe i ai se lanu lanumoana, e fai ma faʻamasinoga pe o le ultrafiltration tube o loʻo misi le porotini.Afai o le fa'agaau e tafe, toe sasaa le pito i luga ma tafe i totonu o se paipa fou e amata ai le ultrafiltration.Ina ia iloa tonu pe na misia ni paipa, fa'amama mo le 10min i le 5mgml o le BSA a'o le'i tafe, fa'aoga i luga o le kelu porotini, po'o le su'esu'ega fa'afefete a Bradford, ma fa'aauau i le fa'aopoopoina o le vaifofo fa'apolotini fa'ato'a totoe (lea e galue i luga o le aisa ma puipuia ai polotini mai le vevela) seia ua faaopoopo uma le concentrate.Fa'aeteete i le taimi ole fa'a'ese'ese pe a o'o mai le timu o polotini, e o'o atu ai i le tapuni o paipa.Afai e timu, fuafua pe o le mafua'aga patino o le timu o le fa'atupuina o le polotini po'o se pa'u le talafeagai;O le mea muamua e mafai ona foia e ala i le ultrafiltration o tele ultrafiltration tubes i le taimi e tasi, faʻaitiitia le faʻatonuga, ma le mea mulimuli e ala i le fesuiaʻiina o vaifofo paʻu eseese seia oʻo ina leai se timu o le polotini e tupu.
(5) O nai laasaga muamua e faʻaaogaina e faʻapipiʻi ai le polotini, ma afai e tatau ona suia le paʻu, faʻaopoopo malie le paʻu fou (ultrafiltration e ala i le 0.22um ultrafiltration membrane) i le tusa ma le 1ml o le protein atoa, ma toe faʻafoʻi i le 1ml mo le tolu. taimi fa'asolosolo, fa'atasi ai ma le voluma fa'ai'u fa'atumauina fa'alagolago i le fa'atonuga o porotini mana'omia, e masani lava e le sili atu i le 500ul, ae fa'apea fo'i i totonu ole 200ul.Ausia le 1000 × pe sili atu i taimi e tolu, e pei o le tele o suiga o le paʻu, e pei ona fuafuaina e le itiiti ifo i le 10 × pe sili atu le faʻatamaoaigaina o le voluma i taimi taʻitasi.
(5) O nai laasaga muamua e faʻaaogaina e faʻapipiʻi ai le polotini, ma afai e tatau ona suia le paʻu, faʻaopoopo malie le paʻu fou (ultrafiltration e ala i le 0.22um ultrafiltration membrane) i le tusa ma le 1ml o le protein atoa, ma toe faʻafoʻi i le 1ml mo le tolu. taimi fa'asolosolo, fa'atasi ai ma le voluma fa'ai'u fa'atumauina fa'alagolago i le fa'atonuga o porotini mana'omia, e masani lava e le sili atu i le 500ul, ae fa'apea fo'i i totonu ole 200ul.Ausia le 1000 × pe sili atu i taimi e tolu, e pei o le tele o suiga o le paʻu, e pei ona fuafuaina e le itiiti ifo i le 10 × pe sili atu le faʻatamaoaigaina o le voluma i taimi taʻitasi.
Taimi meli: Nov-09-2022