PCR, o le tali polymerase filifili, lea e faasino i le faaopoopoga o le dNTP, Mg2 +, elongation mea taua ma amplification faʻaleleia mea i le faiga i lalo o le catalysis o DNA polymerase, faʻaaogaina le matua DNA e fai ma faʻataʻitaʻiga ma primers faʻapitoa e avea ma amataga o le faʻaopoopoga , E ala i la'asaga o le denaturation, fa'alumaina, fa'aopopoga, ma isi, o le fa'agasologa o le fa'atusaina o le tama'i pipi DNA e fa'aopoopo i le DNA fa'ata'ita'iga matua e mafai ona fa'atele vave ma fa'apitoa so'o se DNA taula'i ile vitro.
1. Amata vevela PCR
O le taimi amata o le faʻalauteleina i le PCR masani e le o le tuʻuina o le masini PCR i totonu o le masini PCR, ona amata lea ona faʻateleina le polokalame.A maeʻa le faʻatulagaina o le polokalama, e amata le faʻaopoopoga, lea e ono mafua ai le faʻalauteleina o le le faʻapitoa, ma le PCR vevela e mafai ona foia lenei faʻafitauli.
O le a le PCR amata vevela?A maeʻa ona saunia le faiga o tali, e faʻasaʻo le faʻaogaina o le enzyme i le maualuga o le vevela (e masani ona maualuga atu i le 90 ° C) i le taimi muamua o le faʻavevelaina o le tali poʻo le "vevela amataga", ina ia faʻagaoioia le DNA polymerase.Ole taimi tonu ole fa'agaoioiga ma le vevela e fa'alagolago ile natura ole DNA polymerase ma le suiga vevela-amata.O lenei metotia e masani ona faʻaogaina ai suiga e pei o antibodies, affinity ligands, poʻo vailaʻau faʻasolosolo e taofia ai le gaioiga o le DNA polymerase.Talu ai o le gaioiga o le DNA polymerase e faʻalavelave i le vevela o le potu, o le vevela amata tekonolosi e maua ai le faigofie tele mo le sauniaina o le tele o PCR faʻaogaina faiga i le vevela o le potu e aunoa ma le ositaulagaina o le faʻapitoa o tali PCR.
2. RT-PCR
O le RT-PCR (Reverse transcription PCR) ose faiga fa'ata'ita'i mo le toe fa'aliliuina o le mRNA i le cDNA ma fa'aaogaina e fai ma fa'ata'ita'iga mo le fa'ateleina.O le fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga o le su'eina lea o le RNA atoa i totonu o masini po'o sela muamua, fa'aaoga le Oligo (dT) e fai ma fa'amuamua, fa'aaoga le reverse transcriptase e fa'apipi'i ai le cDNA, ona fa'aaoga lea o le cDNA e fai ma fa'ata'ita'iga mo le fa'alauteleina o le PCR e maua ai le ga'o taula'i po'o le iloa o le fa'aaliga o le gene.
3. PCR fua fa'amulumulu
PCR fa'anenefu fa'anenefu (PCR Quantitative taimi moni,RT-qPCR) e faatatau i le auala o le faaopoopo fluorescent vaega i le faiga PCR tali, e faaaoga ai le faaputuputuina o faailo fluorescent e mataitu le faagasologa atoa PCR i le taimi moni, ma mulimuli ane faaaogaina le curve masani e quantitatively auiliiliina le mamanu.Ole auala masani ole qPCR e aofia ai le SYBR Green I ma le TaqMan.
4. Nested PCR
Nested PCR e fa'atatau i le fa'aogaina o seti se lua o PCR primers mo ta'amilosaga e lua o le fa'alauteleina o le PCR, ma o le fa'aopoopoga o mea o le ta'amilosaga lona lua o le vaega o le kenera taula'i.
Afai o le le fetaui o le paipa muamua o primers (outer primers) e mafua ai ona faʻateleina se oloa e le faʻapitoa, o le avanoa o le itulagi e le faʻapitoa e iloa e le paga lona lua o primers ma faʻaauau ona faʻateleina e matua laʻititi lava, o lea o le faʻateleina e le lua lona lua o primers, o le faʻapitoa o le PCR ua faʻaleleia.E tasi le lelei o le faia o ta'amilosaga se lua o le PCR o le fesoasoani lea e fa'ateleina le tele o oloa mai le fa'atapula'aina o le DNA amata.
5. Touchdown PCR
Touchdown PCR ose auala e fa'aleleia atili ai le fa'apitoa ole tali ole PCR e ala ile fetu'una'iga o ta'amilosaga PCR.
I le touchdown PCR, o le vevela faʻapipiʻi mo nai taʻamilosaga muamua e seti i ni nai tikeri i luga aʻe o le maualuga o le vevela faʻafefe (Tm) o mea muamua.O le maualuga o le vevela o le vevela e mafai ona faʻaitiitia ai le faʻalauteleina e le faʻapitoa, ae i le taimi lava e tasi, o le maualuga o le vevela faʻafefete o le a faʻaleagaina ai le tuʻueseeseina o primers ma faʻasologa faʻasologa, e mafua ai ona faʻaititia le fua o le PCR.O le mea lea, i nai taʻamilosaga muamua, o le vevela faʻafefe e masani ona seti e faʻaitiitia i le 1 ° C i le taamilosaga e faʻateleina ai mea o loʻo i totonu o le kenera taulaʻi i totonu o le tino.Pe a faʻaititia le vevela faʻapipiʻi i le vevela sili ona lelei, e faʻatumauina le vevela faʻafefe mo taʻamilosaga o totoe.
6. Fa'atonu PCR
O le PCR tuusa'o e faasino i le fa'alauteleina o le DNA taula'i sa'o mai le fa'ata'ita'iga e aunoa ma le mana'omia o le fa'aesea ma le fa'amamāina o le nucleic acid.
E lua ituaiga o PCR tuusaʻo:
auala tuusaʻo: ave sina vaega faʻataʻitaʻiga ma faʻapipiʻi saʻo i le PCR Master Mix mo le PCR faʻamaonia;
auala ta'e: ina ua uma sampling le faataitaiga, faaopoopo i le lysate, lyse e faamatuu atu le genome, ave se aofaiga itiiti o le lysed supernatant ma faaopoopo i le PCR Master Mix, faatino PCR faailoaga.O lenei faiga e fa'afaigofie ai le fa'ata'ita'iga o galuega, fa'aitiitia taimi fa'aoga lima, ma aloese mai le leiloa o le DNA i le taimi o le fa'amamāina.
7. SOE PCR
O le fa'apipi'iina o le kenera e ala i le fa'alauteleina o le PCR (SOE PCR) e fa'aogaina ai fa'amatalaga fa'atasi ma pito fa'atasi e fai ai oloa PCR e fausia ai filifili fa'apipi'i, ina ia i ai i le tali fa'aopoopo mulimuli ane, e ala i le fa'alauteleina o filifili o lo'o fa'apipi'iina, o puna eseese o se metotia lea e fa'apipi'i ai vaega fa'ateleina. ma fa'atasi fa'atasi.O lenei tekinolosi o loʻo i ai i le taimi nei ni faʻaoga autu e lua: fausiaina o kenera fusi;gene site-directed mutation.
8. IPCR
O le Inverse PCR (IPCR) e fa'aogaina ai fa'asologa fa'asolosolo fa'atasi e fa'alautele ai vaega o le DNA e ese mai i fa'asologa e lua, ma fa'ateleina fa'asologa le iloa i itu uma e lua o se vaega DNA ua iloa.
O le IPCR na muai mamanuina e fuafua ai le faasologa o itulagi lata ane e le o iloa, ma e tele lava ina faʻaaogaina e suʻesuʻe ai faʻasologa o faʻasologa o gene;oncogenic chromosomal rearrangements, e pei o le fusi o gene, faaliliu ma transposition;ma viral gene integration, o lo'o masani ona fa'aoga i le taimi nei Mo mutagenesis fa'atonu nofoaga, kopi se plasmid ma le suiga mana'omia.
9. dPCR
Digital PCR (dPCR) o se metotia mo le faʻatusatusaina atoatoa o molelaula nucleic acid.
E tolu auala i le taimi nei mo le faʻatusatusaina o molelaʻau nucleic acid.Photometry e faʻavae i luga o le mitiia o molelaula nucleic acid;PCR fa'ata'ita'i fa'aola-taimi (Real Time PCR) e fa'avae i luga o le tau o le Ct, ma o le tau o le Ct e fa'atatau i le numera o le taamilosaga e fetaui ma le tau o le fluorescence e mafai ona iloa;PCR numera o le tekinolosi fa'afuainumera aupito lata mai e fa'avae i luga o le tasi-molole PCR metotia mo le faitauina o le nucleic acid quantification o se metotia fa'afuainumera atoatoa.
Taimi meli: Iuni-13-2023